Targeting Systems DLAR-4說明書

雙熒光素酶測(cè)定試劑測(cè)定鯉魚和高斯熒光素酶活性

目錄號(hào)。

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描述

價(jià)格

DLAR-4

1000次化驗(yàn)

Gaussia/Cypridina雙熒光素酶檢測(cè)試劑

$850.00

這種雙熒光素酶分析試劑有兩種成分——i）用于測(cè)量高斯熒光素酶的高斯熒光素酶分析試劑和用于測(cè)量鯉魚熒光素酶活性的VLAR-2

工具包內(nèi)容

1.100倍柯倫他嗪（儲(chǔ)存溫度為-20°C）

2.高斯熒光素酶分析稀釋緩沖液（儲(chǔ)存于4°C）

3.100x Cypridina熒光素底物（在-80°C下儲(chǔ)存）

4.Cypridina底物稀釋緩沖液（在4°C下儲(chǔ)存）

5.VLAR-2緩沖液（塞浦路斯熒光素酶分析緩沖液）（儲(chǔ)存于4°C）

優(yōu)勢(shì)

·¨Cypridina熒光素酶和Gaussia熒光素酶在轉(zhuǎn)染細(xì)胞的上清液和裂解液中都具有非常強(qiáng)的信號(hào)。因此，可作為雙重分泌報(bào)告者或雙重細(xì)胞內(nèi)報(bào)告者使用。

·¨天然鯉魚（Vargula）熒光素酶和高斯熒光素酶具有天然分泌信號(hào)，表達(dá)后有效分泌到細(xì)胞培養(yǎng)基中。測(cè)定熒光素酶不需要細(xì)胞裂解。

·¨Cypridina熒光素酶比螢火蟲/腎素?zé)晒馑孛噶?0-30倍，具有最高的轉(zhuǎn)換數(shù)和比常用螢火蟲熒光素酶更高的生物發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度，使其成為理想的轉(zhuǎn)錄報(bào)告者（1）。

·¨Gaussia熒光素酶分析系統(tǒng)的穩(wěn)定劑組件在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)提供穩(wěn)定的動(dòng)力學(xué)，為用戶提供高通量分析和手動(dòng)交付分析所需的時(shí)間。

·¨分泌的塞浦路斯熒光素酶蛋白穩(wěn)定，具有*的光產(chǎn)生活性，允許進(jìn)行非常敏感的分析（1,2）。

·¨同時(shí)含有CLuc和分泌型高斯熒光素酶（即轉(zhuǎn)染后的生長(zhǎng)培養(yǎng)基或細(xì)胞裂解物）的樣品可在-20°C下長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

描述：一組經(jīng)過改進(jìn)的超敏感分泌型熒光素酶報(bào)告子已被開發(fā)出來，用于分析同一組轉(zhuǎn)染細(xì)胞中不同的啟動(dòng)子活性。這種方法不僅可以分析同一組細(xì)胞中的三條或多條通路（反應(yīng)），而且還可以在不殺死細(xì)胞的情況下實(shí)時(shí)研究反應(yīng)（因?yàn)檫@三條反應(yīng)器是分泌的）。靶向系統(tǒng)提供了許多不同的細(xì)胞內(nèi)和分泌型雙熒光素酶分析試劑。Cycprida–Gaussia熒光素酶分析系統(tǒng)特別有吸引力，因?yàn)镃ypprida熒光素酶和Gaussia熒光素酶在細(xì)胞內(nèi)和分泌部分都具有強(qiáng)大的活性。當(dāng)使用該試劑進(jìn)行分析時(shí)，它們都具有穩(wěn)定的生物發(fā)光信號(hào)。

塞浦路斯（瓦古拉）熒光素酶：

Cypridina熒光素酶（以前稱為Vargula熒光素酶）來自海洋介形類Vargula Hilgendorfi或Cypridina Noctilucus，是一種分泌型熒光素酶，最大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm。它的亮度大約是螢火蟲熒光素酶的20-30倍。擁有最高的營業(yè)額。與螢火蟲熒光素酶不同，Cypridina-lcufierase不需要ATP，并催化其*底物Cypridina-luciferin的氧化，如前所述

圖1:Cypridina熒光素酶催化的光化學(xué)反應(yīng)。

Cypridina熒光素不同于腔烯特拉嗪，腔烯特拉嗪是雷尼拉、高斯和Metridia熒光素的底物。由于其*的底物和明亮的分泌型熒光素酶活性，Cypridina熒光素酶在涉及Gaussia、Renilla或Firefly熒光素酶的多重檢測(cè)中特別有用。分泌型CLuc是一種非常穩(wěn)定的蛋白質(zhì)。由于這一特性，從上清液中測(cè)得的活性反映了在取樣之前累積的蛋白質(zhì)量。塞浦路斯熒光素酶是由細(xì)胞自然分泌的（圖2）。因此，細(xì)胞裂解對(duì)于熒光素酶活性的測(cè)定是不必要的。

高斯熒光素酶：關(guān)于高斯熒光素酶：

高斯熒光素酶（GLuc）是海洋橈足類高斯熒光素酶（1,2）。這種不需要ATP的熒光素酶在產(chǎn)生光的反應(yīng)中催化底物柯倫他嗪的氧化，與其他發(fā)光報(bào)告基因相比，它具有相當(dāng)大的優(yōu)勢(shì)，例如分泌性和更亮的信號(hào)強(qiáng)度，以及生物發(fā)光信號(hào)的穩(wěn)定性（約10%在一小時(shí)內(nèi)衰減）。從轉(zhuǎn)染了表達(dá)GLuc的質(zhì)粒的培養(yǎng)細(xì)胞上清液中測(cè)得的發(fā)光與產(chǎn)生的酶量成正比，這反過來又反映了轉(zhuǎn)錄水平?；蛘?，可以使用細(xì)胞裂解物進(jìn)行分析。雖然大部分活性是分泌的，但高斯熒光素酶的高靈敏度也允許從細(xì)胞裂解物中進(jìn)行測(cè)量。

使用Gaussia熒光素酶分析試劑（GAR-1或DLAR-4組分1）試劑的天然GLuc生物發(fā)光信號(hào)動(dòng)力學(xué)：使用靶向系統(tǒng)的GAR-1試劑測(cè)量細(xì)胞上清液（轉(zhuǎn)染Gaussia熒光素酶表達(dá)載體）中的Gaussia熒光素酶活性
圖2b：光發(fā)射動(dòng)力學(xué)。使用塞浦路斯熒光素酶分析試劑（VLAR-2或DLAR-4組分2）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pCMV-VLuc表達(dá)載體的HEK 293細(xì)胞上清液評(píng)估塞浦路斯熒光素酶生物發(fā)光信號(hào)的穩(wěn)定性
該試劑適用于需要分析大量樣品的高溫超導(dǎo)應(yīng)用。在沒有穩(wěn)定器的情況下，信號(hào)強(qiáng)度最初略高，但衰減速度比有穩(wěn)定器時(shí)快。
注：數(shù)據(jù)是在Turner TD2020光度計(jì)上測(cè)量的三次測(cè)定的平均值。