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Haematologic HCBT-0022說明書

發(fā)布時間:2018/10/25      點(diǎn)擊次數(shù):1005

 

Haematologic Technologies,Inc。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注冊公司,是一家專業(yè)從事體外研究用高質(zhì)量血漿蛋白分離和表征的主要制造商。HTI的重點(diǎn)是凝血級聯(lián)中涉及的蛋白質(zhì),以及骨代謝的調(diào)節(jié)。HTI產(chǎn)品系列包括超過150種高度純化和充分表征的蛋白質(zhì),包括酶原,酶,輔因子和抑制劑,以及單克隆和多克隆抗體的互補(bǔ)系列。還可提供因子缺乏的等離子體和定制的血液采集管,用于臨床研究。提供的服務(wù)包括定制蛋白質(zhì)純化,蛋白質(zhì)修飾,化驗(yàn)開發(fā),合同制造和合同研究。

 

haemtech Haematologic Technologies,Inc。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注冊公司,是一家專業(yè)從事體外研究用高質(zhì)量血漿蛋白分離和表征的主要制造商。HTI的重點(diǎn)是凝血級聯(lián)中涉及的蛋白質(zhì),以及骨代謝的調(diào)節(jié)。HTI產(chǎn)品系列包括超過150種高度純化和充分表征的蛋白質(zhì),包括酶原,酶,輔因子和抑制劑,以及單克隆和多克隆抗體的互補(bǔ)系列。還可提供因子缺乏的等離子體和定制的血液采集管,用于臨床研究。提供的服務(wù)包括定制蛋白質(zhì)純化,蛋白質(zhì)修飾,化驗(yàn)開發(fā),合同制造和合同研究。

 

Haematologic HCBT-0022說明書

 

 

凝血酶(β,γ)

蛋白水解形式的α-凝血酶
上文說明了人α-凝血酶向較低活性形式的降解模式。通過在Arg106-Tyr107鍵處切割完整的B鏈產(chǎn)生β-凝血酶,產(chǎn)生B1和B2片段。通過在Lys190-Gly191鍵處進(jìn)一步切割β-凝血酶B2鏈產(chǎn)生γ-凝血酶,產(chǎn)生B4和B5片段。盡管未示出,但B3片段是通過在Lys190-Gly191鍵處切割完整B鏈而衍生的潛在中間體,產(chǎn)生通常稱為β'-凝血酶的產(chǎn)物。(此處使用的氨基酸編號始于A鏈的NH2末端并繼續(xù)通過B鏈)。

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 HCBT-0022 人體β凝血酶

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尺寸

100微克

公式

的10mM磷酸鈉4,0.3M NaCl,pH為6.5

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存儲

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

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活動決定

纖維蛋白原凝血試驗(yàn)

保質(zhì)期(妥善保存)

12個月

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 HCGT-0021 人類γ凝血酶

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尺寸

100微克

公式

的100mM磷酸鈉4,0.1%PEG,pH 6.5的

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存儲

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

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活動決定

纖維蛋白原凝血試驗(yàn)

保質(zhì)期(妥善保存)

12個月

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α-凝血酶是通過酶原凝血酶原的蛋白水解活化產(chǎn)生的高度特異性絲氨酸蛋白酶(1)。已經(jīng)顯示純化形式的α-凝血酶(2-4)在長期儲存時經(jīng)歷自溶作用至較低活性形式。在用胰蛋白酶(5)有限消化α-凝血酶時觀察到類似的失活。這些蛋白水解形式的α-凝血酶被稱為β-凝血酶和γ-凝血酶。通過在Arg106-Tyr107鍵處切割B鏈產(chǎn)生人β-凝血酶。通過在Lys190-Gly191鍵處進(jìn)一步切割β-凝血酶B2鏈產(chǎn)生γ-凝血酶。通過在Arg-154處單個裂解凝血酶形成另一種形式的蛋白水解凝血酶,稱為β'-凝血酶。γ-凝血酶通過B鏈中這兩個位點(diǎn)(Arg70 / 73和Arg-154)的蛋白水解切割產(chǎn)生。這些切割導(dǎo)致不再共價連接到凝血酶分子上的肽的釋放,但通過離子交換和凝膠過濾色譜保持相關(guān)。這些蛋白水解形式的凝血酶保留了切割小合成底物(6,7)和一些蛋白質(zhì)底物如因子XIII(8),抗凝血酶III(9)和凝血酶原(10)的能力。它們凝固纖維蛋白原(11),裂解血小板反應(yīng)蛋白(12)或激活蛋白C(9)的能力已顯著降低。

通過TPCK處理的胰蛋白酶的有限蛋白水解,基本上通過Braun等人的方法,由純化的α-凝血酶制備人β-凝血酶和γ-凝血酶。(5)。蛋白水解形式的α-凝血酶在100mM NaH 2 PO 4,pH 6.5緩沖液中提供,應(yīng)儲存在-20℃。通過SDS-PAGE評估純度,并使用纖維蛋白原凝固測定評估活性。

凝膠

Novex 4-12%Bis-Tris

加載

人β和γ凝血酶,每通道1μg

緩沖

MES

標(biāo)準(zhǔn)

SeeBluePlus 2; 肌球蛋白(188 kDa),磷酸化酶B(98 kDa),BSA(62 kDa),谷氨酸脫氫酶(49 kDa),酒精脫氫酶(38 kDa),碳酸酐酶(28 kDa),肌紅蛋白紅(17 kDa),溶菌酶(14 kDa),抑肽酶(6kDa),胰島素,B鏈(3kDa)。

注意

其他污染物來自凝血酶,并且可以占額外帶質(zhì)量的~5%。

 

行動方式

蛋白水解形式的 - 凝血酶,其保留對小底物,因子XIII和凝血酶原的活性,但對纖維蛋白原,蛋白C活化和抗凝血酶III結(jié)合的活性降低。

分子量

36700(B-凝血酶)
36700(G-凝血酶)
4000(A鏈)* 
34300(B鏈)* 
6000(B1鏈)* 
10400(B5鏈)* 
11800(B4鏈)* 
*通過SDS測定的表觀分子量-PAGE分析

消光系數(shù)

Ë

1%

1厘米,280納米

 

= 18.3

 

結(jié)構(gòu)體

b-凝血酶:三條鏈(A,B1,B2),A鏈和B2鏈??之間的二硫鍵。g-凝血酶:四條鏈(A,B1,B5,B4),在A肽和B5肽之間具有二硫鍵。

 

 

 

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