ALSTEM M050說(shuō)明書(shū)

ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴(kuò)展的產(chǎn)品和服務(wù)組合，為生物制藥和學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)提供服務(wù)。受到加利福尼亞干細(xì)胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細(xì)胞重編程和基因組編輯技術(shù)專業(yè)知識(shí)的科學(xué)家創(chuàng)立。

EZStem™ Stem Cell Freezing Medium: #M050

EZStem™干細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基：＃M050

產(chǎn)品描述

開(kāi)發(fā)EZStem™干細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基，在培養(yǎng)人胚胎干（ES）和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS）時(shí)，在冷凍保存期間保持無(wú)異源和無(wú)飼養(yǎng)細(xì)胞條件。它是一種用于人ES / iPS細(xì)胞冷凍保存的即用型解決方案。用EZStem TM干細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基保存的人多能干細(xì)胞導(dǎo)致高細(xì)胞活力和恢復(fù)，并且在解凍后表達(dá)典型的多能標(biāo)記物。EZStem™干細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基已經(jīng)在人ES和iPS細(xì)胞上進(jìn)行了測(cè)試。與含有血清的冷凍培養(yǎng)基和競(jìng)爭(zhēng)無(wú)血清產(chǎn)品相比，獲得了更好的結(jié)果，使其成為用于冷凍保存有價(jià)值的人多能干細(xì)胞的理想產(chǎn)品。

• 概觀

該方案可用于冷凍保存用飼養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)的人胚胎干（hES）細(xì)胞或無(wú)飼養(yǎng)細(xì)胞條件。該方法描述了在6孔板的一個(gè)孔中培養(yǎng)的細(xì)胞的冷凍保存。如果冷凍多個(gè)孔，可以按比例放大量，但是，每個(gè)低溫小瓶中只應(yīng)將1ml細(xì)胞懸浮液等分。始終將EZStem Freezing Medium放在冰上。

• 程序

1.在冰上準(zhǔn)備EZStem冷凍培養(yǎng)基。

2.在6孔板中培養(yǎng)細(xì)胞直至60％至80％匯合。

3.從hES / hiPS細(xì)胞培養(yǎng)物中吸出培養(yǎng)基并用DPBS（2mL /孔）沖洗。

4.每孔加入0.5mL EZStem無(wú)酶干細(xì)胞解離溶液（目錄號(hào)M100，ALSTEM）。將其在室溫下靜置1-2分鐘。

5.吸出解離溶液，每孔用2 mL DMEM / F-12輕輕沖洗2 - 3次。

6.加入2mL /孔新鮮培養(yǎng)基，用細(xì)胞刮刀刮去菌落。

7.將分離的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至15mL錐形管中。

8.在室溫下以200×g離心5分鐘。

9.輕輕吸出上清液，輕敲管底，松開(kāi)細(xì)胞沉淀。

10.輕輕地將顆粒重新懸浮在冷的EZStem冷凍培養(yǎng)基中，注意使團(tuán)塊留下比通常用于傳代的團(tuán)塊更大的團(tuán)塊。

11.將1mL細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到每個(gè)標(biāo)記的低溫小瓶中。

12.將小瓶放入異丙醇冷凍容器中，將容器置于-80℃過(guò)夜。

13.第二天轉(zhuǎn)移到液氮罐。

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