goryochemical通過(guò)許可和內(nèi)部增值創(chuàng)造創(chuàng)新熒光探針，方法是擴(kuò)大細(xì)胞生物學(xué)的應(yīng)用，并方便地將其帶給學(xué)術(shù)界、小型生物技術(shù)公司和大型制藥公司的研究人員。

在invitro和invivo與生命科學(xué)儀器公司建立了*的合作關(guān)系。

實(shí)驗(yàn)階段創(chuàng)造了理解假設(shè)驅(qū)動(dòng)和發(fā)現(xiàn)研究的解決方案。與光學(xué)探針相關(guān)的堅(jiān)實(shí)的化學(xué)背景，通過(guò)與東京大學(xué)(長(zhǎng)野教授和烏拉諾教授)和北海道大學(xué)(諾貝爾獎(jiǎng)獲得者鈴木教授)的關(guān)系，使高陽(yáng)成為連接invitro和invivo以及人類翻譯的熒光試劑的主要供應(yīng)商。

在臨床試驗(yàn)中，我們還開(kāi)發(fā)了新的熒光探針，可以在日本的臨床前和臨床試驗(yàn)中用于熒光圖像引導(dǎo)手術(shù)檢測(cè)癌癥。

在不久的將來(lái)，我們將為患者提供熒光圖像引導(dǎo)手術(shù)的新方法。

goryochemical GC301說(shuō)明書(shū)

AcidiFluor™ ORANGE

酸性熒光橙色

活細(xì)胞酸性細(xì)胞器的熒光探針(試驗(yàn)尺寸)

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• 高信噪比
• 橙色熒光，可用于多色成像
• *的光穩(wěn)定性

acid Fluor ORANGE是一種熒光成像探針，可在酸性環(huán)境中顯著增強(qiáng)熒光。該探針能選擇性地染色溶酶體、晚期內(nèi)體和顆粒等酸性細(xì)胞器。其優(yōu)異的選擇性能夠檢測(cè)酸性環(huán)境。即，在pH5.0的條件下，與酸性細(xì)胞器的環(huán)境相同，熒光強(qiáng)度是物理pH 7.4的50倍或更多。acid Fluor ORANGE對(duì)照射激發(fā)光表現(xiàn)出很強(qiáng)的光穩(wěn)定性。由于它通過(guò)在532納米或514納米激發(fā)發(fā)出橙色熒光，多色成像通過(guò)與藍(lán)色熒光(CFP、赫希斯特等)結(jié)合成為可能。)，綠色熒光(綠色熒光蛋白、熒光素等。)和近紅外熒光。acid Fluor ORANGE可用于檢測(cè)酸性細(xì)胞器、觀察顆粒釋放、胞吞/胞吐成像等。

酸性熒光橙的特點(diǎn)

λabs 535 nm
λfl 560 nm

pKa 5.1

高信噪比

圖1。酸熒光橙的熒光光譜與酸堿度的關(guān)系

酸性熒光橙的熒光光譜分別在pH 5.0或pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中測(cè)定。pH 5.0緩沖液對(duì)應(yīng)于酸性細(xì)胞器中的條件，pH 7.4對(duì)應(yīng)于生理細(xì)胞質(zhì)條件。酸性熒光橙在pH 5.0時(shí)的熒光強(qiáng)度比pH 7.4緩沖液中的熒光強(qiáng)度提高了50倍。(λex 532 nm / λem 568 nm)

發(fā)出橙色熒光，可用于多色成像

圖2使用HeLa細(xì)胞的多色成像的例子

用酸性熒光橙和Hoechst33342對(duì)表達(dá)線粒體-綠色熒光蛋白的HeLa細(xì)胞進(jìn)行多重染色。溶酶體用酸性熒光橙色染色，細(xì)胞核用Hoechst33342染色為藍(lán)色，線粒體用綠色熒光蛋白染色為綠色。如圖2所示，酸性熒光橙色可用于多色成像

*的光穩(wěn)定性

圖3通過(guò)光浸試驗(yàn)與競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手產(chǎn)品的比較

樣品被連續(xù)照射180秒，并在共焦顯微鏡下觀察。盡管溶血跟蹤器綠色DND-26和溶血跟蹤器紅色DND-99顯著變色，但酸性熒光橙色的熒光仍然存在。溶血傳感器綠色DND-189不適合連續(xù)觀察，因?yàn)闊晒馔ㄟ^(guò)激發(fā)光照射泄漏到細(xì)胞質(zhì)中。
高陽(yáng)化學(xué)公司在廣瀨賢三教授(東京大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)系醫(yī)學(xué)研究生院教授)的指導(dǎo)下，將酸性熒光橙商業(yè)化。酸性熒光橙獲得東京大學(xué)的許可。該產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)得到日本科學(xué)技術(shù)署(JST)項(xiàng)目“測(cè)量和分析系統(tǒng)和技術(shù)的開(kāi)發(fā)”的支持。

酸性熒光橙問(wèn)答

我能用于固定樣品嗎？

不。不幸的是，酸性熒光橙色不能用于固定樣品。據(jù)推測(cè)，酸性熒光橙在固定樣品中可能不發(fā)熒光，因?yàn)樗嵝原h(huán)境不能通過(guò)固定作用保持在酸性細(xì)胞器中。酸性細(xì)胞器中的酸性環(huán)境似乎只有在細(xì)胞存活時(shí)，才能利用三磷酸腺苷作為能源。

什么樣的成像是可能的？

酸性熒光橙可用于溶酶體成像、RBL-2H3脫顆粒成像(如應(yīng)用筆記所示)和使用中性粒細(xì)胞或胰島素瘤的胞吐成像等。一旦我們準(zhǔn)備好，這些應(yīng)用程序?qū)⒃趹?yīng)用筆記中發(fā)布。

除了pH 7.4和pH 5.0外，熒光光譜如何？

在pH 3.0-pH8.0緩沖溶液中測(cè)得的酸性熒光橙色的熒光強(qiáng)度光譜如下所示。酸堿值變得越小，熒光發(fā)射的強(qiáng)度增加。

關(guān)于細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的研究:酸性熒光橙色能標(biāo)記抗體或蛋白質(zhì)嗎？

使用酸性熒光橙-NHS(GC302)可以使蛋白質(zhì)進(jìn)入酸性細(xì)胞器時(shí)發(fā)出熒光。

熒光強(qiáng)度在小于3的酸堿度下波動(dòng)嗎？

酸性熒光橙的強(qiáng)度在小于3的酸堿度下波動(dòng)不大。

酸性熒光橙-NHS問(wèn)答

標(biāo)簽產(chǎn)量是如何確定的？

標(biāo)記產(chǎn)率可以通過(guò)使用以下公式來(lái)確定。用酸性熒光橙-NHS的濃度除以目標(biāo)蛋白的濃度，可以估算出與目標(biāo)蛋白分子結(jié)合的酸性熒光橙分子的數(shù)量。

A544,280:標(biāo)記蛋白在544納米或280納米的吸光度

CF:校正系數(shù)(0.12)

e酸性熒光橙-NHS:酸性熒光橙-NHS的摩爾吸光系數(shù)(80，000)

e蛋白質(zhì):目標(biāo)蛋白質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)(例如IgG為216，000)

有效標(biāo)記目標(biāo)蛋白的宜方法是什么？

我們建議使用純化的抗體或蛋白質(zhì)。如果您想標(biāo)記蛋白質(zhì)混合物，請(qǐng)通過(guò)超濾或凝膠過(guò)濾去除污染物質(zhì)。尤其是胺的污染(例如。Tris)導(dǎo)致標(biāo)記效率降低。

值得注意的是，如果過(guò)量的染料結(jié)合到目標(biāo)蛋白上(每個(gè)蛋白分子7-8個(gè)分子)，就會(huì)導(dǎo)致熒光信號(hào)飽和或目標(biāo)蛋白變性。

酸性熒光橙色染料可用于固定細(xì)胞成像嗎？

很抱歉，酸化熒光橙色-NHS僅用于“活”細(xì)胞成像。這是因?yàn)槟遗葜械乃嵝原h(huán)境被固定過(guò)程破壞了。

CaSiR-1/CaSiR-1AM的問(wèn)答

什么是調(diào)幅酯？

氨基甲烷代表乙酰氧基甲基，氨基甲烷酯由羧酸衍生而來(lái)，以增加質(zhì)膜的滲透性。如下圖所示，CaSiR-1AM滲透細(xì)胞膜，其乙酰氧基甲基被細(xì)胞內(nèi)酯酶裂解，形成能與鈣相互作用的CaSiR-1結(jié)構(gòu)2+。當(dāng)乙酰氧基甲基被裂解產(chǎn)生CaSiR-1時(shí)，水溶性顯著增加，這變得難以泄漏胞外液體。

CaSiR-1/CaSiR-1調(diào)幅對(duì)其他陽(yáng)離子有響應(yīng)嗎？

卡西爾-1和卡西爾-1調(diào)幅在高達(dá)1毫米毫克的情況下幾乎沒(méi)有發(fā)射2+或者高達(dá)100毫米納+或者國(guó)王+。

當(dāng)我用卡西爾-1上午給細(xì)胞染色時(shí)，有必要添加普朗尼克F-127(清潔劑)嗎？

不僅卡西爾-1調(diào)幅，而且所有調(diào)幅酯探針都具有*的親脂性。因此，在調(diào)幅酯溶解在二甲基亞砜中，然后直接分散在緩沖溶液中的情況下，它們聚集并變得難以進(jìn)入細(xì)胞。因此，有必要通過(guò)添加去污劑和在某些情況下，另外對(duì)去污劑和氨基甲酸酯的溶液進(jìn)行超聲處理來(lái)制備很好地結(jié)合到細(xì)胞中的染色溶液。

CaSiR-1/CaSiR-1調(diào)幅的細(xì)胞毒性如何

雖然我們還沒(méi)有進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)，但我們計(jì)劃比較我們的產(chǎn)品和競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手的產(chǎn)品的細(xì)胞毒性。我們一做實(shí)驗(yàn)，就把結(jié)果上傳到惠普。此外，由于激發(fā)光毒性是小波長(zhǎng)%3E長(zhǎng)波長(zhǎng)，與藍(lán)色、綠色或紅色鈣探針相比，近紅外探針CaSiR-1不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成太大傷害。

POLARIC問(wèn)答

為什么顏色會(huì)改變？

因?yàn)橛H和力不同。

POLARIC通過(guò)改變?nèi)軇﹣?lái)改變顏色，我們稱之為溶劑變色。(左側(cè)圖片顯示。)

溶劑有一個(gè)叫做極性的指數(shù)。POLARIC熒光探針對(duì)溶劑的親和力受溶劑極性的影響，如類水或類油。這改變了溶解的POLARIC熒光探針，例如，藍(lán)色代表色拉油，綠色代表酒精，紅色代表水。因此，POLARIC熒光探針和溶劑之間的親和力差異可以表現(xiàn)為顏色的變化。

這一特性使我們能夠替代各種現(xiàn)象，如溫度變化、壓力變化、酸堿度變化和硬度變化等。POLARIC熒光探針的顏色變化。

圖1賈布朗斯基圖和溶劑重取向的模式圖

光吸收激發(fā)POLARIC熒光探針后，它們的激發(fā)狀態(tài)通過(guò)周圍溶劑的重新定向而穩(wěn)定。

由于處于激發(fā)狀態(tài)的探針?lè)肿拥碾姾珊艽蟪潭壬鲜蔷植康?，極性溶劑比非極性溶劑更有效地穩(wěn)定激發(fā)狀態(tài)。穩(wěn)定性的差異反映在熒光波長(zhǎng)的差異上。

ET(30)每種溶劑的值如表所示。如圖2所示，當(dāng)POLARIC溶解在每種溶劑中時(shí)，顏色從藍(lán)色(左側(cè))變?yōu)辄S色(右側(cè))。這是因?yàn)楫?dāng)ET(30)當(dāng)ET(30)價(jià)值大。

ET(30)每種溶劑的值

圖2溶解POLARIC的各種溶劑的紫外圖像照片