express*tems 95-020-020說(shuō)明書(shū)

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轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基

Expression Systems的轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基設(shè)計(jì)用于補(bǔ)充ESF 921和ESF AF昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基，用于桿狀病毒載體生產(chǎn)中的共轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)染步驟。轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基是一種無(wú)血清和無(wú)動(dòng)物的制劑，可促進(jìn)昆蟲(chóng)宿主細(xì)胞對(duì)載體DNA的攝取。 

轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基 Transfection Medium

Expression Systems的轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基設(shè)計(jì)用于補(bǔ)充ESF 921和ESF AF昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基，用于桿狀病毒載體生產(chǎn)中的共轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)染步驟。轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基是一種無(wú)血清和無(wú)動(dòng)物的制劑，可促進(jìn)昆蟲(chóng)宿主細(xì)胞對(duì)載體DNA的攝取。 

• 描述

Expression Systems的轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基設(shè)計(jì)用于補(bǔ)充ESF 921和ESF AF昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基，用于桿狀病毒載體生產(chǎn)中的共轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)染步驟。轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基是一種無(wú)血清和無(wú)動(dòng)物的制劑，可促進(jìn)昆蟲(chóng)宿主細(xì)胞對(duì)載體DNA的攝取。通過(guò)使用專為ESF 921和ESF AF設(shè)計(jì)的配方，實(shí)現(xiàn)更高的滴度。

• 無(wú)血清，無(wú)動(dòng)物配方可與ESF 921和ESF AF無(wú)縫配合使用
• 適用于PEI或脂質(zhì)轉(zhuǎn)染介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染
• 優(yōu)化用于Expres 2 TR轉(zhuǎn)染試劑
• 增加病毒載體的產(chǎn)生和瞬時(shí)表達(dá)
• 可提供20 mL或100 mL瓶裝

將Expression Systems的轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基與使用Grace培養(yǎng)基進(jìn)行共轉(zhuǎn)染以產(chǎn)生桿狀病毒載體的舊技術(shù)進(jìn)行了比較。包括無(wú)血清培養(yǎng)基作為對(duì)照。與其他培養(yǎng)基相比，使用轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基從共轉(zhuǎn)染得到的病毒滴度高幾個(gè)對(duì)數(shù)。還確定瞬時(shí)表達(dá)作為DNA攝取的量度。同樣，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基導(dǎo)致顯著更好的結(jié)果，其中g(shù)p64表達(dá)細(xì)胞的百分比比其他培養(yǎng)基高至少兩倍。

Sf9細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，并以2×10 6的濃度接種到深孔區(qū)塊的各個(gè)孔中每孔每100μl細(xì)胞。將DNA和脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑一起在200μl測(cè)試培養(yǎng)基（無(wú)血清培養(yǎng)基，Grace's培養(yǎng)基或表達(dá)系統(tǒng)'轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基）中孵育30分鐘。將DNA混合物加入細(xì)胞中，并將體積在測(cè)試培養(yǎng)基中升至1ml。將細(xì)胞懸浮液在27℃下孵育4小時(shí)，同時(shí)搖動(dòng)。在溫育結(jié)束時(shí)，用無(wú)血清培養(yǎng)基將每孔的體積升至4ml并培養(yǎng)4天。使用gp64流式細(xì)胞術(shù)方法測(cè)定上清液的P0（即共轉(zhuǎn)染產(chǎn)物）感染單位（IU）病毒滴度。通過(guò)用gp64-PE染色測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞的gp64的瞬時(shí)表達(dá)。

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