訂貨信息

德國(guó)癌癥研究中心?*授權(quán)經(jīng)銷商代理---上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司提醒您不要購(gòu)買所謂分裝的抗體，以免影響您的檢測(cè)，購(gòu)買請(qǐng)認(rèn)準(zhǔn)原廠代理

文章摘要：對(duì)惡性腫瘤患者，腫瘤細(xì)胞疫苗通過(guò)激活宿主主動(dòng)免疫，可以延長(zhǎng)患者的生存期。有效的免疫應(yīng)答需要腫瘤抗原在腫瘤基質(zhì)中，由細(xì)胞通過(guò)組織相容性抗原（MHC）遞呈來(lái)實(shí)現(xiàn)。以往的體外試驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和在新鮮組織標(biāo)本中已證實(shí)腫瘤抗原與抗原遞呈細(xì)胞上的MHC相互作用。但還無(wú)法應(yīng)用于臨床。德國(guó)癌癥研究中心的Lukas Bunse等通過(guò)鄰位連接技術(shù)（proximity ligation assay, PLA）優(yōu)化臨床檢測(cè)過(guò)程，在膠質(zhì)瘤的石蠟切片中驗(yàn)證腫瘤抗原與MHCⅡ的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)表在2015年2月的《The Journal of Clinical Investigation》上。

【Ref: Bunse L, et al. J Clin Invest. 2015 Feb;125(2):593-606. doi: 10.1172/JCI77780. Epub 2015 Jan 2.】

對(duì)惡性腫瘤患者，腫瘤細(xì)胞疫苗通過(guò)激活宿主主動(dòng)免疫，可以延長(zhǎng)患者的生存期。有效的免疫應(yīng)答需要腫瘤抗原在腫瘤基質(zhì)中，由細(xì)胞通過(guò)組織相容性抗原（MHC）遞呈來(lái)實(shí)現(xiàn)。以往的體外試驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和在新鮮組織標(biāo)本中已證實(shí)腫瘤抗原與抗原遞呈細(xì)胞上的MHC相互作用。但還無(wú)法應(yīng)用于臨床。德國(guó)癌癥研究中心的Lukas Bunse等通過(guò)鄰位連接技術(shù)（proximity ligation assay, PLA）優(yōu)化臨床檢測(cè)過(guò)程，在膠質(zhì)瘤的石蠟切片中驗(yàn)證腫瘤抗原與MHCⅡ的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)表在2015年2月的《The Journal of Clinical Investigation》上。

PLA是一種高靈敏度蛋白質(zhì)檢測(cè)新技術(shù)，通過(guò)一對(duì)核酸適體探針識(shí)別目標(biāo)蛋白分子。當(dāng)目標(biāo)蛋白相互作用時(shí)，它們?cè)诳臻g位置上相互接近，并與特異核酸鏈連接，并經(jīng)PCR反應(yīng)擴(kuò)增特異核酸鏈，來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)相互作用的目標(biāo)蛋白分子檢測(cè)、定位和定量。

該研究結(jié)果顯示，通過(guò)PLA方法可以原位檢測(cè)膠質(zhì)瘤內(nèi)MHCⅡ分子和突變型異檸檬酸脫氫酶1（IDH1R132H）蛋白的相互作用，確定這些蛋白的免疫抗原性和抗原表位。作者認(rèn)為該檢測(cè)技術(shù)能用于獲得在膠質(zhì)瘤組織中是否存在特異性抗原的必要信息，有助于指導(dǎo)臨床上對(duì)具有特異性抗原膠質(zhì)瘤的免疫治療。

圖1. A圖示突變型IDH1R132H單克隆抗體（H09）在彌漫性星形細(xì)胞瘤上的免疫組化染色；B圖示IDH1蛋白包含第132位氨基酸的15肽和20肽；C圖示B中多肽與H09的ELISA結(jié)果，p122-136、p124-138、p123-142、p126-140的免疫原性zui強(qiáng)；D和E圖示IDH1R132H多肽與MHC II復(fù)合物可以*抑制游離IDH1R132H與H09的ELISA結(jié)果。

圖2. A圖為抗HLA-DR和H09進(jìn)行PLA的示意圖，其中紅圈表示PCR擴(kuò)增循環(huán)，α和β為HLA-DR鏈，pIDH為IDH1抗原表位多肽。B圖為膠質(zhì)瘤細(xì)胞株LN229的流式和免疫熒光結(jié)果。C圖為IDH1及其突變型的生化反應(yīng)，后者特征性產(chǎn)生2HG。D圖為野生型IDH1、突變型IDH1R132H和IDH1D252G基因代謝產(chǎn)物2HG的濃度。E和F圖為L(zhǎng)N229過(guò)度表達(dá)突變型IDH1的Western blot和免疫熒光結(jié)果。

圖3. A圖通過(guò)PLA技術(shù)可以看到IDH1R132H和HLA-DR在IDH1R132H過(guò)表達(dá)的LN229細(xì)胞株中存在共定位（colocalization）。B圖通過(guò)RNA干擾抑制HLA-DR表達(dá)可以消除這種共定位現(xiàn)象。C圖通過(guò)流式試驗(yàn)證實(shí)RNA干擾可以顯著降低HLA-DR表達(dá)。D圖示IDH1R132H和HLA-DR的PLA（紅色）和IDH1R132H染色（綠色）。E圖示IDH1R132H和HLA-DR的PLA和IDH1R132H表達(dá)在過(guò)度表達(dá)IDH1R132H的LN229細(xì)胞中的相關(guān)性。

圖4. A圖示NCH620細(xì)胞株的IDH1R132H-HLA-DR的PLA、IDH1R132H的IHC和HLA-DR的IHC。B圖和C圖分別示膠質(zhì)瘤細(xì)胞株NPH001和NCH645的IDH1R132H-HLA-DR的PLA。D圖示NCH620細(xì)胞株的IDH1R132H-HLA-DR的PLA和HLA-DR的熒光共標(biāo)。

（感謝 ：復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院小卡西烏斯編譯，復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院陳靈朝博士審校，復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院陳銜城教授終審）